血球核型検査法は、染色体異常の情報を提供するために開発されました。リンパ球の細胞は通常、その後の細胞分裂を行いません。マイトジェン存在下、リンパ球はDNA複製により刺激され、有糸分裂に移行する。48-72時間後、分裂阻害剤を培養液に添加し、分裂をメタフェースの段階で停止させる。低張液で処理し、固定、染色した後、染色体を顕微鏡で観察し、異常の有無を評価することができます。
高解像度分析とは、通常の血液核型分析に特別な操作を加え、後期プロフェーズまたはプロメタフェーズにある多数の分裂図形を得ることを目的としています。この段階では、染色体は長く、凝縮していません。G-bandingの後、染色体は通常の分析では見られない高いバンド分解能を示すようになります。高分解能は、核型のより詳細な分析を可能にします。
細胞周期のS期(DNA合成)にある細胞をブロックするチミジン生合成阻害剤であるメトトレキサート(MTX)を添加することで培養を同期化することができます。16~18時間後、培養液中の分裂している細胞のほとんどがS期にある。チミジンを培養液に添加すると、MTXのブロックが解除され、細胞は同期して分裂に進み、その時点でコルセミドを添加することができる。小さな欠失や再配列が疑われる場合、この方法と併用して非常に短いコルセミド処理を行うことで、プロメタフェーズ染色体の延長を行うことができる場合があります。
材料
メトトレキサート(アメトプテリン)、HBSS中10-5M:各1.5mlを含む4つのバイアル中。
チミジン、蒸留水中10-3M:各1.5ml入りバイアル4本
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