Kit de reagentes em solução 12-008-60

de colcemidaHBSShipotônico

O método de cariotipagem das células sanguíneas foi desenvolvido para fornecer informações sobre anomalias cromossómicas. As células linfocitárias não sofrem normalmente divisões celulares subsequentes. Na presença de um mitogénio, os linfócitos são estimulados a entrar em mitose através da replicação do ADN. Após 48-72 horas, é adicionado à cultura um inibidor mitótico para parar a mitose na fase de metáfase. Após tratamento com solução hipotónica, fixação e coloração, os cromossomas podem ser observados microscopicamente e avaliados quanto a anomalias. A análise de alta resolução é uma manipulação especial do procedimento de cariotipagem sanguínea de rotina, concebida para fornecer um grande número de figuras mitóticas na prófase tardia ou na prometáfase. Nesta fase da mitose, os cromossomas são mais longos e menos condensados. Após a colocação da banda G, os cromossomas apresentam um maior nível de resolução de banda, não observado nas análises de rotina. A alta resolução permite uma análise mais pormenorizada do cariótipo. As culturas podem ser sincronizadas através da adição de metotrexato (MTX), um inibidor da biossíntese da timidina que bloqueia as células na fase S (síntese de ADN) do ciclo celular. Após 16-18 horas, a maioria das células em divisão na cultura encontra-se na fase S. Se for adicionada timidina à cultura, o bloqueio do MTX é libertado e as células avançam sincronizadamente para a mitose, altura em que pode ser adicionada colcemida. Um tratamento muito curto com colcemida, em conjugação com esta técnica, pode ser utilizado para produzir cromossomas em prometáfase alargada quando se suspeita de pequenas deleções ou rearranjos. Materiais Metotrexato (ametopterina), 10-5M em HBSS: 4 frascos contendo 1,5 ml cada Timidina, 10-3M em água destilada: 4 frascos contendo 1,5 ml cada