Kit de teste para oncologia EG-90068-NGS

para doenças gastrointestinaisde genesde sangue

Os kits EliGene® NGS permitem a amplificação por PCR multiplex de todas as regiões-alvo necessárias do(s) gene(s) de interesse. A quantidade recomendada de ADN para cada reação de PCR multiplex situa-se entre 20 e 100 ng de ADN derivado de material fixado em formalina e incluído em parafina (FFPE) ou de sangue. Em seguida, os amplicões resultantes são marcados com códigos de barras com sequências MID e misturados por amostra. Esta amostra é quantificada e sequenciada utilizando um instrumento NGS Illumina para sequenciação paralela massiva (MPS) de acordo com as instruções do fabricante. As leituras das sequências resultantes são subsequentemente analisadas por comparação com a sequência de referência do(s) gene(s) visado(s) para identificar as posições das variantes. Introdução Os kits EliGene® NGS são utilizados para uma ou mais reacções de PCR multiplex que resultam na amplificação de regiões alvo de uma amostra. Para a amplificação é utilizado um mastermix pronto a usar que contém uma polimerase de ADN de arranque a quente. Os amplicões resultantes de cada multiplex são diluídos 100 vezes. Na segunda etapa, é efectuada uma segunda ronda de PCR utilizando o kit EliGene® Adaptor-IL NGS, que permite a marcação de todos os amplicons para incorporar MIDs e adaptadores p7 e p5 necessários para a sequenciação Illumina MiSeq. Os amplicões marcados resultantes são misturados por indivíduo, aplicando um esquema de mistura específico do ensaio predefinido. Cada biblioteca de amplicões é subsequentemente purificada a partir de pequenos fragmentos de ADN residuais com menos de 150 pb e a concentração de ADN é determinada utilizando uma PCR em tempo real com padrões de concentração.