Linear em oito ou mais ordens de grandeza de concentração de enzima.
Sensível a 10-20 moles de luciferase.
Ensaio simples não homogéneo para quantificar a atividade da luciferase do pirilampo
O Sistema de Ensaio da Luciferase é um reagente extremamente sensível e rápido para a quantificação da luciferase do pirilampo. Os resultados lineares são observados em pelo menos oito ordens de grandeza de concentração de enzima, e menos de 10-20 moles de luciferase podem ser medidos em condições óptimas. Geralmente, é possível obter uma sensibilidade 100 vezes superior à do ensaio da cloranfenicol acetiltransferase (CAT).
O reagente do ensaio da luciferase gera uma luz quase constante durante pelo menos 1 minuto, pelo que o ensaio é compatível com a medição da luciferase utilizando um luminómetro de tubo único ou um luminómetro de placa de vários poços com um auto-injetor. É preferível um luminómetro, mas não é necessário, uma vez que o ensaio é adaptável a contadores de cintilação.
Reagentes de lise celular utilizados com o sistema de ensaio da luciferase
O Luciferase Assay System é um ensaio não homogéneo; as células que contêm a luciferase têm de ser lisadas antes da adição do reagente. Glo Lysis Buffer , Cell Culture Lysis Reagent , Passive Lysis Buffer e Reporter Lysis Buffer podem ser utilizados com o Luciferase Assay System para a quantificação de repórteres em células de mamíferos. O Reporter Lysis Buffer permite a realização de ensaios de luciferase, CAT e β-galactosidase a partir do mesmo extrato celular. O Luciferase Assay System também pode ser utilizado para quantificação em células vegetais e bacterianas, mas apenas o Cell Culture Lysis Reagent é adequado para estas aplicações.
Em alguns kits, o tampão de lise está incluído e noutros tem de ser adquirido separadamente
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