Este kit ELISA utiliza o princípio Competitive-ELISA. A placa micro ELISA fornecida neste kit foi pré-revestida com PYD. Os padrões ou amostras são adicionados aos poços apropriados da placa micro ELISA e, em seguida, com um anticorpo conjugado com biotina específico para PYD. De seguida, adiciona-se avidina conjugada com peroxidase de rábano (HRP) a cada poço da microplaca e incuba-se. Depois, adiciona-se a solução de substrato TMB. A reação enzima-substrato é terminada pela adição de uma solução de ácido sulfúrico e a mudança de cor é medida espectrofotometricamente a um comprimento de onda de 450nm ± 10nm. A concentração de PYD nas amostras é então determinada por comparação da DO das amostras com a curva padrão.
Dados técnicos
Uma vez que os valores de DO da curva padrão podem variar de acordo com as condições de realização do ensaio (por exemplo, operador, técnica de pipetagem, técnica de lavagem ou efeitos da temperatura), o operador deve estabelecer uma curva padrão para cada teste. A curva padrão típica e os dados são fornecidos abaixo apenas para referência.
Precisão
Precisão intra-ensaio (precisão dentro de um ensaio): 3 amostras com nível baixo, médio e alto foram testadas 20 vezes numa placa, respetivamente.
Precisão inter-ensaio (Precisão entre ensaios): 3 amostras com níveis baixo, médio e alto foram testadas em 3 placas diferentes, com 20 réplicas em cada placa, respetivamente.
Taxa de recuperação
A recuperação de três níveis diferentes de substâncias contaminadas em amostras ao longo do intervalo do ensaio foi avaliada em várias matrizes.
Linear
As amostras foram marcadas com concentrações elevadas de proteínas alvo e diluídas com Padrão de Referência e Diluente de Amostra para produzir amostras com valores dentro do intervalo do ensaio.
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