IgA humana. Os padrões ou amostras são adicionados aos poços da placa micro ELISA e combinados com o anticorpo específico. Em seguida, adiciona-se sucessivamente a cada poço da microplaca um anticorpo de deteção biotinilado específico para a IgA humana e o conjugado Avidina-Horseradish Peroxidase (HRP) e incuba-se. Os componentes livres são lavados. A solução de substrato é adicionada a cada alvéolo. Apenas os alvéolos que contêm IgA humana, anticorpo de deteção biotinilado e conjugado Avidina-HRP apresentarão uma cor azul. A reação enzima-substrato é terminada pela adição de solução de paragem e a cor torna-se amarela. A densidade ótica (DO) é medida espectrofotometricamente a um comprimento de onda de 450 nm ± 2 nm. O valor da DO é proporcional à concentração de IgA humana. É possível calcular a concentração de IgA humana nas amostras comparando a DO das amostras com a curva padrão.
Dados técnicos
Uma vez que os valores de DO da curva padrão podem variar de acordo com as condições do desempenho real do ensaio (por exemplo, operador, técnica de pipetagem, técnica de lavagem ou efeitos da temperatura), o operador deve estabelecer uma curva padrão para cada teste. A curva padrão típica e os dados são fornecidos abaixo apenas para referência.
Precisão
Precisão intra-ensaio (precisão dentro de um ensaio): 3 amostras com nível baixo, médio e alto foram testadas 20 vezes numa placa, respetivamente.
Precisão inter-ensaio (Precisão entre ensaios): 3 amostras com níveis baixo, médio e alto foram testadas em 3 placas diferentes, com 20 réplicas em cada placa, respetivamente.
Taxa de recuperação
A recuperação de três níveis diferentes de substâncias contaminadas em amostras ao longo do intervalo do ensaio foi avaliada em várias matrizes.
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