Kit de reagentes solução tampão SMART-Seq® HT

para ácidos nucleicospara sequenciamento de DNApara síntese de DNAc

O kit principal SMART-Seq HT (SS-HT) e o kit SMART-Seq HT PLUS (SS-HT PLUS) são kits de fácil automatização que utilizam oligo(dT) priming para gerar cDNA completo de alta qualidade diretamente a partir de 1-100 células ou 10 pg-1 ng de RNA total. Para além do kit principal de síntese de cDNA, o kit SS-HT PLUS inclui também um kit de preparação de bibliotecas e placas UDI (unique dual index) de utilização única para gerar bibliotecas de sequenciação compatíveis com Illumina, o que o torna uma solução completa de ponta a ponta. O kit de síntese de cDNA SS-HT tem um protocolo simplificado optimizado para trabalhar a jusante do FACS e reduz o tempo de trabalho em comparação com os kits SMART-Seq v4, devido à introdução de uma conveniente transcrição reversa combinada e passo de amplificação PCR. A tecnologia central SMART (Switching Mechanism at 5' End of RNA Template) que alimenta a síntese de cDNA proporciona uma cobertura completa dos transcritos, tornando-a uma ferramenta poderosa para o estudo da expressão genética em células individuais, incluindo junções de emenda e emendas alternativas. O priming Oligo(dT) é utilizado para amplificar especificamente o ARNm a partir de ARN total de alta qualidade (RIN >8) ou de células intactas. A tecnologia LNA melhora a eficiência da troca de modelos, o que aumenta o número de genes identificados em comparação com outros métodos. O kit SS-HT PLUS incorpora a nossa química patenteada de preparação de bibliotecas, que utiliza a fragmentação enzimática e adaptadores stem-loop para construir bibliotecas de alta qualidade compatíveis com Illumina a partir do cDNA sintetizado com o kit principal. Este fluxo de trabalho de duas etapas tem lugar num único tubo e pode ser concluído em cerca de duas horas - não são necessárias etapas de purificação intermédias.