Reagente com enzimas GspSSD

DNA polimerasepara amplificação isotérmicakit LAMP

Mastermix original da OptiGene para amplificação isotérmica - basta adicionar o modelo e os primers. Contém a nova polimerase de ADN GspSSD LF da OptiGene. Velocidade de amplificação superior. Adequado para a amplificação isotérmica rápida de ADN. A atividade de transcriptase reversa nativa permite RT-LAMP de enzima única. Um alvo de ADN (VKORC1) foi amplificado a partir de gDNA humano (Sigma). foram realizadas reacções LAMP de 25μl a 65ºC durante 60 minutos num termociclador em tempo real (Roche LC-480), em duplicado. O "Time to result" é definido como o momento em que o valor de fluorescência da amplificação atinge um limiar de 10% da fluorescência máxima. As misturas principais isotérmicas da OptiGene (ISO-001 e ISO-004) foram comparadas com o kit WarmStart LAMP (ADN e ARN) da NEB [Lote:0021609]. O ISO-001 e o ISO-004 NÃO contêm uma enzima específica de transcriptase reversa (RT). Para uma comparação real com a mistura NEB (que contém uma enzima de transcriptase reversa separada e específica), foram adicionadas 0,5U de AMV-RT às reacções OptiGene Master Mix (ISO-001 inc. RT e ISO-004 inc. RT). As reacções padrão ISO-001 e ISO-004 RT-LAMP foram também comparadas para demonstrar a excelente atividade de transcriptase reversa inerente da mistura. Um alvo de ARN (Beta-actina) foi amplificado a partir de ARN total humano (Ambion). foram realizadas reacções RT-LAMP de 25μl a 65ºC durante 60 minutos num termociclador em tempo real (Roche LC-480), em duplicado. O "Time to result" é definido como o momento em que o valor de fluorescência da amplificação atinge um limiar de 10% da fluorescência máxima.