Este kit ELISA utiliza o princípio Sandwich-ELISA. A placa micro ELISA fornecida neste kit foi pré-revestida com um anticorpo específico para o TNF-α do rato. Os padrões ou amostras são adicionados aos poços da placa micro ELISA e combinados com o anticorpo específico. Em seguida, adiciona-se sucessivamente a cada poço da microplaca um anticorpo de deteção biotinilado específico para o TNF-α de rato e o conjugado Avidina-peroxidase de rábano (HRP) e incuba-se. Os componentes livres são lavados. A solução de substrato é adicionada a cada alvéolo. Apenas os alvéolos que contêm TNF-α de rato, anticorpo de deteção biotinilado e conjugado Avidina-HRP apresentam uma coloração azul. A reação enzima-substrato é terminada pela adição de solução de paragem e a cor torna-se amarela. A densidade ótica (DO) é medida espectrofotometricamente a um comprimento de onda de 450 nm ± 2 nm. O valor da DO é proporcional à concentração de TNF-α de rato. É possível calcular a concentração de TNF-α de rato nas amostras comparando a DO das amostras com a curva padrão.
Dados técnicos
Uma vez que os valores de DO da curva padrão podem variar de acordo com as condições do desempenho real do ensaio (por exemplo, operador, técnica de pipetagem, técnica de lavagem ou efeitos da temperatura), o operador deve estabelecer uma curva padrão para cada teste. A curva padrão típica e os dados são fornecidos abaixo apenas para referência.
Precisão
Precisão intra-ensaio (precisão dentro de um ensaio): 3 amostras com nível baixo, médio e alto foram testadas 20 vezes numa placa, respetivamente.
Precisão inter-ensaio (Precisão entre ensaios): 3 amostras com níveis baixo, médio e alto foram testadas em 3 placas diferentes, com 20 réplicas em cada placa, respetivamente.
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