A colinesterase (CHE) catalisa a hidrólise do substrato butiriltiocolina, formando butirato e tiocolina. Esta última reduz o ácido 5,5'-mercaptobis-2-nitrobenzóico (DMNB) a 5-mercapto-2-nitrobenzoato (5-MNBA), um composto colorido. A reação é monitorizada cineticamente a 405 nm com base na taxa de formação de cor amarela, proporcional à atividade de CHE na amostra.
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