O método baseia-se na hidrólise enzimática dos triglicéridos séricos em glicerol e ácidos gordos livres (AGL) por ação da lipase lipoproteica (LPL). O glicerol é fosforilado pelo trifosfato de adenosina (ATP) na presença da glicerol quinase (GK) para formar glicerol-3-fosfato (G-3-P) e difosfato de adenosina (ADP). O G-3-P é oxidado pela glicerofosfato oxidase (GPO) em fosfato de dihidroxiacetona (DHAP) e peróxido de hidrogénio. Na presença de peroxidase (POD)
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