Este procedimento baseia-se num método enzimático melhorado, originalmente concebido para avaliar a creatinina sérica e urinária. O ensaio é efectuado em duas fases. Na primeira fase, a creatina é eliminada durante os minutos iniciais de pré-incubação da amostra com creatinase. Na segunda fase, a adição de creatininase inicia a reação, hidrolisando a creatinina na amostra na presença de sarcosina oxidase (Sar OD) com a produção de peróxido de hidrogénio:_x000D_
Creatinina + H2O → Creatina_x000D_
Sarcosina + H2O + O2 → H2O2 + Glicina + HCHO_x000D_
O peróxido de hidrogénio derivado da reação da oxidase é quantificado por uma reação do tipo Trinder em que o derivado cromogénico HTIB e a 4-aminoantipirina (4-AA) se condensam na presença da peroxidase (POD) para formar um corante vermelho de quinonimina
4-AA + HTIB → Quinonimina + H2O_x000D_
A taxa de desenvolvimento da cor é proporcional à concentração de creatinina na amostra.
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