結核菌のような抗酸菌の同定のための改良型塩基性フクシン染色(非加熱)。
原理
本染色キットは、WHOが推奨するZiehl-Neelsen染色(carbofulfuchsin溶液)をベースにしています。結核菌やMycobacterium lepraeのような抗酸菌は、細胞壁にリポイドカプセルを持つため染色が困難である。しかし、リポイドカプセルをカルボルフシンのような増強染料で染色すると、新たに形成された化合物は酸-アルコールによる脱色に抵抗し、染色された元の色(赤色)を保持するため、カウンターブルーの染料をまだ吸着している他の微生物と容易に区別することができる。
方法
コールド染色:
1.塗抹標本を炎で固定し、カルボルフクシン(Carbolfuchsin)を加えて5分以上染色する(加熱しない)。
2.軽く水ですすぎます(ビブルペーパーで軽く拭き取ります)。
3.酸性アルコールで2分間脱色する。
4.軽く水で洗い流す(試料の表面に赤色が残っている場合は、赤色が完全に脱色されるまで再度Acid Alcoholを加える)。
5.メチレンブルーを30秒間塗布する。軽く水ですすぎ、自然乾燥させる。完成したスライドを顕微鏡で観察する。
注意
1.この方法は加熱染色にも用いられる。
2.脱色剤を使い切った場合は、バソーの脱色剤を購入することをお勧めする。
3.使用後は気化を防ぐため、すぐに試薬瓶のキャップをすること。
4.喀痰検体の場合、検出率を上げるために塗抹標本を適切に厚くする必要があります。塗抹標本が厚い場合は、カウンターステインの時間をコントロールする必要があります。バックグランドが濃すぎると顕微鏡検査に影響します。
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