Kit de reagentes para preparação de amostras KAPA RNA EvoPrep

DNA polimeraseDNA ligasepara pesquisa

Visão geral
Os kits KAPA RNA EvoPrep fornecem um fluxo de trabalho simplificado de preparação de bibliotecas de RNA para sequenciamento de nova geração (NGS). Com base na linha KAPA RNA HyperPrep Kit, os EvoPrep convertem RNA de entrada em bibliotecas ligadas a adaptadores prontas para sequenciamento, com menos etapas e menor tempo de manipulação. Produto destinado apenas para uso em pesquisa (RUO) e não para procedimentos diagnósticos.

KAPA RNA EvoPrep Kit para preparação de bibliotecas RNA

• Fluxo rápido de 3,5 horas com tempo de manuseio mínimo
• Sensível: detecta mais transcritos únicos, inclusive de entradas baixas e RNA degradado (FFPE)
• Confiável: alta concordância entre quantidades de entrada e resultados reprodutíveis

Principais benefícios e destaques

• Fluxo simplificado reduz o tempo de manuseio, o uso de reagentes e o consumo de plástico
• Melhor taxa de conversão de bibliotecas e maiores rendimentos em uma ampla faixa de entradas
• Aumento da captura de moléculas únicas (melhor taxa de mapeamento único, menor duplicação e menor porcentagem de adaptador-dímero)
• Compatível com automação: compatível com automação de manipulação líquida e fluxos de trabalho Roche AVENIO Edge System
• Inclui química de ligação aprimorada (KAPA EvoT4 DNA ligase) e KAPA HiFi HotStart DNA Polymerase no mix de amplificação para PCR de alta fidelidade e baixo viés

Desempenho e sensibilidade
Os kits apresentam desempenho aprimorado em comparação com os KAPA RNA HyperPrep Kits anteriores e vários kits concorrentes: detectam mais genes e transcritos em entradas FFPET de baixa qualidade e em entradas baixas (5 ng) até entradas mais altas (até os máximos recomendados pelo kit). Os dados apresentados destacam: maior número de genes detectados em amostras FFPET de baixa qualidade, maiores taxas de mapeamento único, redução nas taxas de duplicação e menores percentuais de adaptador-dímero.

Resumo do fluxo de trabalho

• Enriquecimento inicial opcional: captura de mRNA (esferas oligo-dT poly(A)) ou depleção de rRNA e/ou globina (hibridização com oligos de DNA complementares seguida de tratamento RNase H/DNase)
• Fragmentação de RNA (calor + magnésio)
• Síntese do 1º filamento de cDNA por priming randômico
• Síntese do 2º filamento combinada com A-tailing (dUTP incorporado no 2º filamento para especificidade de fita)
• Ligação de adaptadores (ligação TA a fragmentos A-tailed)
• Amplificação da biblioteca usando polimerase de alta fidelidade (a fita marcada com dUTP não é amplificada para permitir especificidade de fita)

Compatibilidade e entradas recomendadas
Tabela (variantes do produto e entradas típicas):
Product variant — Typical reactions — EAN
KAPA RNA EvoPrep (24rxn) — 24 reactions — 07613336240564
KAPA RNA EvoPrep (96rxn) — 96 reactions — 07613336240557
KAPA RNA EvoPrep Kit (384rxn) — 384 reactions — 07613336239308
KAPA mRNA EvoPrep (24rxn) — 24 reactions — 07613336239377
KAPA mRNA EvoPrep (96rxn) — 96 reactions — 07613336239384
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase HMR (24rxn) — 24 reactions — 07613336239315
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase HMR (96rxn) — 96 reactions — 07613336239322
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase HMR (384rxn) — 384 reactions — 07613336239339
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase Globin (96rxn) — 96 reactions — 07613336239353
KAPA RNA EvoPrep+RiboErase Globin (384rxn) — 384 reactions — 07613336239360

Notas sobre entradas e tipos de amostra: as faixas de entrada recomendadas variam conforme a variante do kit (exemplos incluem faixas como 0,25 ng–100 ng para certos kits RNA EvoPrep, 5 ng–1 µg ou 25 ng–1 µg para outros). KAPA mRNA EvoPrep destina-se a RNA de alta qualidade (RIN ≥ 7) e fluxos de trabalho de seleção poly(A); kits com RiboErase (HMR) / Globin destinam-se à depleção de humano/mouse/rat e são compatíveis com RNA FFPE de baixa qualidade quando usados com entradas e ajustes de protocolo apropriados.

Armazenamento e manuseio
Orientações típicas de armazenamento: componentes sensíveis à temperatura (reagentes de síntese de cDNA e preparação de biblioteca) devem ser armazenados a –15°C a –25°C; alguns componentes de enriquecimento inicial (por ex., captura mRNA) a 2°C–8°C; KAPA HyperPure Beads a 2°C–8°C. Siga as Instruções de Uso para armazenamento, manuseio e pontos de parada recomendados no protocolo.

Observação regulatória / de uso
Apenas para uso em pesquisa. Não utilizar em procedimentos diagnósticos.

Especificações

• Família de produtos: KAPA RNA EvoPrep
• Aplicação principal: preparação de bibliotecas de RNA para NGS (transcriptoma completo, expressão gênica, junções de splicing, fusões gênicas, lncRNA)
• Opções de enriquecimento: sem enriquecimento (RNA total), captura mRNA (poly(A)), depleção rRNA e/ou globina (HMR/Globin)
• Faixas de entrada (exemplos por kit): 0,25 ng–100 ng; 5 ng–1 µg; 25 ng–1 µg (depende da variante)
• Tempo de preparação da biblioteca (típico): ~3,5 horas (protocolo simplificado)
• Fragmentação: calor + magnésio, ajustável à qualidade do input
• Especificidade de fita: Sim (incorporação de dUTP no 2º filamento; sequenciamento strand-specific)
• Química de ligação: KAPA EvoT4 DNA ligase
• Polimerase de amplificação: KAPA HiFi HotStart DNA Polymerase
• Limpeza com beads: KAPA HyperPure Beads fornecidas para etapas de purificação
• Automação: Compatível com automação de manejo de líquidos e Roche AVENIO Edge System
• Compatibilidade por espécie: KAPA RNA EvoPrep (sem enriquecimento) — ampla (eucariotos, microrganismos, plantas, etc.); kits com RiboErase (HMR)/Globin — oligos de depleção para humano, camundongo, rato
• Vantagens típicas: sensibilidade aprimorada (mais transcritos únicos), maiores taxas de mapeamento único, menor duplicação e adaptador-dímero, menos reagentes/limpezas