O ácido sulfanílico diazotizado transforma a bilirrubina em azobilirrubina colorida, que é determinada fotometricamente. Das duas fracções de bilirrubina presentes no soro, o glucuronato de bilirrubina e a bilirrubina livre associada à albumina, apenas a primeira reage diretamente, enquanto a bilirrubina livre necessita de ser dissociada da proteína por um acelerador para reagir. A bilirrubina indireta é calculada pela diferença entre a bilirrubina total (com acelerador) e a bilirrubina direta (sem acelerador). Os conceitos de "direta" e "indireta" referem-se exclusivamente às caraterísticas da reação na presença ou ausência de aceleradores ou solubilizadores e são apenas equivalentes aproximados das duas fracções de bilirrubina mencionadas.
---