O ácido sulfanílico diazotizado transforma a bilirrubina em azobilirrubina colorida, que é determinada fotometricamente. Das duas fracções de bilirrubina presentes no soro, o glucuronato de bilirrubina e a bilirrubina livre associada à albumina, apenas a primeira reage diretamente, enquanto a bilirrubina livre necessita de ser dissociada da proteína por um acelerador para reagir. A bilirrubina indireta é calculada pela diferença entre a bilirrubina total (com acelerador) e a bilirrubina direta (sem acelerador). Os conceitos de "direta" e "indireta" referem-se exclusivamente às caraterísticas da reação na presença ou ausência de aceleradores ou solubilizadores e são apenas equivalentes aproximados das duas fracções de bilirrubina mencionadas.
A bilirrubina direta (conjugada) reage com o sal de diazónio 2,4-diclorofenildiazónio (2,4-DPD) na presença de ácido sulfâmico, formando azobilirrubina. Este complexo colorido pode ser medido fotometricamente a 546 nm. Das duas fracções de bilirrubina presentes no soro, a bilirrubina glucuronato (conjugada) e a bilirrubina livre associada à albumina (não conjugada), apenas a primeira reage diretamente, enquanto a bilirrubina livre necessita de ser dissociada da proteína por um acelerador para reagir. A bilirrubina indireta é calculada pela diferença entre a bilirrubina total (com acelerador) e a bilirrubina direta (sem acelerador). Os conceitos de "direta" e "indireta" referem-se exclusivamente às caraterísticas da reação na presença ou ausência de aceleradores ou solubilizadores e são apenas equivalentes aproximados das duas fracções de bilirrubina mencionadas.
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