ジアゾ化スルファニル酸はビリルビンを着色したアゾビリルビンに変換し、これを光度計で測定する。血清中のビリルビンにはグルクロン酸ビリルビンとアルブミンに結合した遊離ビリルビンがあるが、直接反応するのはグルクロン酸ビリルビンのみで、遊離ビリルビンは促進剤でタンパク質から解離させなければ反応しない。間接ビリルビンは、総ビリルビン(促進剤あり)と直接ビリルビン(促進剤なし)の差で計算される。直接」および「間接」の概念は、促進剤または可溶化剤の存在下または非存在下での反応特性のみを指し、2つの言及されたビリルビン分画に対する近似的な等価物にすぎない。
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