本 ELISA キットはサンドイッチ ELISA 法を採用しています。本キットに含まれるマイクロ ELISA プレートには Rat TNF-α に特異的な抗体がプレコートされています。標準品または検体をマイクロ ELISA プレートウエルに添加し、特異抗体と結合させます。次に Rat TNF-α に特異的なビオチン化検出抗体とアビジン-西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)コンジュゲートを各マイクロプレートウェルに順次添加し、インキュベートします。遊離成分を洗浄する。基質溶液を各ウェルに添加する。Rat TNF-α、ビオチン化検出抗体、Avidin-HRPコンジュゲートを含むウェルのみが青く発色します。酵素-基質反応は停止液の添加により終了し、色は黄色に変わります。光学濃度(OD)は、450nm±2nmの波長で分光光度計により測定される。OD 値は Rat TNF-α の濃度に比例します。検体の OD 値を標準曲線と比較することにより、検体中の Rat TNF-α 濃度を算出することができます。
技術データ
標準曲線の OD 値は、実際の測定条件(操作者、ピペッティング技術、洗浄技術、温度の影響など)によ って異なる場合がありますので、操作者は各検査ごとに標準曲線を作成する必要があります。以下に代表的な標準曲線とデータを参考までに示します。
精度
イントラアッセイ精度(アッセイ内の精度):1プレートで低濃度、中濃度、高濃度の3検体をそれぞれ20回測定。
アッセイ間精度(アッセイ間の精度):アッセイ間精度(アッセイ間の精度):低濃度、中濃度、高濃度の3検体を3種類のプレートでそれぞれ20回ずつ測定。
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