本キットは競合 ELISA 法に準拠しています。本キットに含まれるマイクロ ELISA プレートには SPH がプレコートされています。標準品または検体を適切なマイクロ ELISA プレートウエルに添加し、SPH に特異的なビオチン結合抗体を添加します。次に西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)結合アビジンを各ウエルに添加し、インキュベートします。TMB基質溶液を添加する。硫酸溶液を加えて酵素-基質反応を停止させ、波長 450nm±10nmでの色の変化を分光光度計で測定する。その後、サンプルのODを標準曲線と比較することにより、サンプル中のSPH濃度を決定する。
技術データ
標準曲線の OD 値は、実際の測定条件(操作者、ピペッティング技術、洗浄技術、温度の影響など)によ って異なる場合がありますので、操作者は各検査ごとに標準曲線を作成する必要があります。以下に代表的な標準曲線とデータを参考までに示します。
精度
イントラアッセイ精度(アッセイ内の精度):1プレートで低濃度、中濃度、高濃度の3検体をそれぞれ20回測定。
アッセイ間精度(アッセイ間の精度):アッセイ間精度(アッセイ間の精度):低濃度、中濃度、高濃度の3検体を3種類のプレートでそれぞれ20回ずつ測定。
回収率
様々なマトリックスにおいて、アッセイ範囲全体を通して、3つの異なるレベルでスパイクされたサンプルの回収率を評価した。
線形
サンプルに高濃度の標的タンパク質をスパイクし、リファレンススタンダードとサンプル希釈液で希釈して、アッセイの範囲内の値を持つサンプルを作製しました。
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