本 ELISA キットはサンドイッチ ELISA 法を採用しています。本キットに含まれるマイクロ ELISA プレートには Mouse MCP-1 に特異的な抗体がプレコートされています。検体(または標準品)をマイクロ ELISA プレートウエルに添加し、Mouse MCP-1 特異的抗体およびビオチン化検出抗体と結合させます。次にアビジン-西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)結合体を各マイクロプレートウェルに順次添加し、インキュベートする。遊離成分は洗浄除去する。基質溶液を各ウェルに添加する。Mouse MCP-1、ビオチン化検出抗体、Avidin-HRPコンジュゲートを含むウェルだけが青く発色します。酵素-基質反応は停止液の添加により終了し、色は黄色に変わります。光学濃度(OD)は、波長450 nmで分光光度計により測定されます。OD 値は Mouse MCP-1 の濃度に比例します。検体の OD 値を標準曲線と比較することにより、検体中の Mouse MCP-1 濃度を算出することができます。
技術データ
標準曲線の OD 値は実際の測定条件(操作者、ピペッティング技術、洗浄技術、温度の影響など)によ って異なることがありますので、操作者は各検査ごとに標準曲線を作成する必要があります。以下に代表的な標準曲線とデータを参考までに示します。
精度
イントラアッセイ精度(アッセイ内の精度):1プレートで低濃度、中濃度、高濃度の3検体をそれぞれ20回測定。
アッセイ間精度(アッセイ間の精度):アッセイ間精度(アッセイ間の精度):低濃度、中濃度、高濃度の3検体を3種類のプレートでそれぞれ20回ずつ測定。
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