スダンブラックは中性脂肪染色用です。
原理
脂質の染色は溶液の物理的性質または吸着に依存すると考えられている。スダンブラック染色液を有機溶媒に溶解すると、凍結組織の脂質に対する溶解度は元の溶媒に対する溶解度よりも高くなる。そのため、染色中に色素が有機溶媒から脂質に移行し、脂質染色が生じる。
方法
1.凍結組織を6~10μmに切断し、蒸留水で洗浄する。
2.組織を50~70%エタノールで20~30秒間洗浄する。
3.スダンブラックB溶液に3~5分間浸す。
4.50~70%エタノールで数秒間、スライド上のゆるい色がなくなるまで濃縮する。
5.蒸留水ですすぐ。
6.Nuclear Fast Red溶液で5分間カウンターステインする。
7.蒸留水で1~2分間洗浄する。
8.スライドの周りの余分な水分を取り除き、空気中で乾燥させる。
9.アラビナンまたはグリセリンゼリーでマウントする。
注意
1.脂質は有機溶媒に溶けやすいため、脂質を表示するには、パラフィン組織ではなく凍結組織を染色する。
2.脂質の染色に使用する凍結組織は、薄すぎないようにする。さもないと、脂質の含有量が失われる可能性がある。
3.染色は長時間は残らないので、できるだけ早く観察し、写真を撮る。
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